研究大蒜籽水浸液杀灭日本血吸虫尾蚴实验浅谈
来源：UC论文网2015-12-03 17:47
摘要：
【摘 要】探讨不同浓度的大蒜籽水浸液对日本血吸虫尾蚴及钉螺的杀灭效果。方法 配制不同浓度的大蒜籽水浸液，观察杀灭日本血吸虫尾蚴和钉螺的时间；不同浓度的大蒜籽水浸液处
【摘 要】探讨不同浓度的大蒜籽水浸液对日本血吸虫尾蚴及钉螺的杀灭效果。方法 配制不同浓度的大蒜籽水浸液，观察杀灭日本血吸虫尾蚴和钉螺的时间；不同浓度的大蒜籽水浸液处理日本血吸虫尾蚴后感染小鼠，经灌注法加撕碎法收集虫体，计算感染率，实验设脱氯清水为对照组。结果 随大蒜籽水浸液浓度的升高，杀死日本血吸虫的平均时间越少。其中浓度为100%时杀死日本血吸虫尾蚴的平均时间分别2.52s，对照组直至载玻片上清水干燥为止708.29s，仍有活跃尾蚴；用100%浓度的大蒜籽水浸液杀灭全部钉螺的时间为1d，对照组至3.5d后存活率仍有80%。用各浓度的大蒜籽水浸液处理后的日本血吸虫尾蚴感染小鼠，感染率均为0，对照组为100%。结论 大蒜籽水浸液对日本血吸虫尾蚴及钉螺杀灭均有很强作用。
【关键词】大蒜籽水浸液；日本血吸虫；尾蚴
大蒜 Allium sativum L.（Garlic）又叫蒜头、大蒜头、胡蒜、葫、独蒜、独头蒜，是蒜类植物的统称。半年生草本植物，百合科葱属，以鳞茎入药。春、夏采收，扎把，悬挂通风处，阴干备用。6月叶枯时采挖，除去泥沙，通风晾干或烘烤至外皮干燥。含有硫胺素、核黄素、尼克酸、蒜素、柠檬醛以及硒和锗等微量元素。含挥发油约0.2%，油中主要成分为大蒜辣素，具有杀菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸受大蒜酶的作用水解产生。尚含多种烯丙基、丙基和甲基组成的硫醚化合物等。一般用来治疗细菌性痢疾和阿米巴痢疾。其提取物对多种细菌、霉菌、病毒等有杀灭或抑制作用，并对钉螺有杀灭作用。我们已报道大蒜籽浸液对日本血吸虫尾蚴有较好的杀灭效果。为了进一步了解大蒜籽浸液的有关作用，我们对大蒜籽浸液涂肤预防日本血吸虫尾蚴感染的效果进行了研究。研究不同浓度大蒜籽水浸液对日本血吸虫尾蚴的杀灭作用，来探寻一种既对环境无污染，又有高效的灭螺灭尾蚴作用的一类物质，来推进血吸虫防治的工作。
材料和方法
1 实验材料
1.1大蒜籽浸液制备 市场购大蒜籽250g，剥皮，脱氯清水洗净晾干，多功能食品粉碎机
捣碎压汁即成大蒜籽液（简称蒜液）。
1.2 尾蚴由湖南省血吸虫病防治研究所提供，实验当日释放尾蚴。
1.3 昆明小鼠，3月龄，重量20-25g，雌雄比例各半。
2 方法
2.1 杀灭尾蚴试验 实验当日逸放日本血吸虫尾蚴。分别吸取各浓度大蒜籽浸液100μl分别置于载玻片上，用接种环将尾蚴加入玻片上，每片加入活尾蚴100条左右（每浓度做5片），镜下观察记录杀灭尾蚴时间。以解剖针触及尾蚴，不活动者判为死亡[5]。至尾蚴全部死亡为杀灭尾蚴时间，设脱氯清水对照组。
2.2杀灭钉螺试验 取56个250ml矿泉水瓶，去除瓶口，洗净。每瓶加入大蒜籽浸液50ml，浓度分别为100%、50.00%、25.00%、12.50%、6.23%、3.13%、1.57%、0.79%，每个浓度6瓶。对照组加入脱氯水。每瓶随机加入10只钉螺，各组每天于相同时间随机取出一瓶，做存活检查，活动不明显者以压片鉴别死活[6]。
2.3动物感染试验 分别取100%、50.00%、25.00%、12.50%、6.23%、3.13%、1.57%、0.79%的大蒜籽浸液100μl于载玻片上，加入血吸虫尾蚴40条，放置30min后贴于已麻醉的小鼠腹部，感染20min。各浓度组感染5只，重复实验2次，40d后解剖，用灌注法加撕碎法收集虫体。首先经上腔静脉灌注冲洗，解剖镜下计数其肝、肠静脉丛内的虫体数，灌洗结束，取下肝、肠，用小镊子将肝与肠系膜拉碎，检查、计数未冲出的虫体，计算感染率。另设脱氯清水感染对照组。
3 结果
3.1 杀灭尾蚴作用 浓度分别为100%、50.00%、25.00%、12.50%、6.23%、3.13%、1.57%、0.79%杀灭日本血吸虫尾蚴的平均时间分别2.52s，9.38s，38.5s，64.64s，
103.28s，142.8s，194s，294.02s，对照组尾蚴直至载玻片上清水干燥为708.29s，仍有活跃尾蚴。
3.2杀灭钉螺作用 浓度分别为100%、50.00%、25.00%、12.50%、6.23%、3.13%、1.57%、0.79%大蒜籽浸液杀灭全部钉螺的时间为1、1.5、1.5、1.5、2、2、3、3d，对照组至3.5d后存活率仍有80%。见表一。
表一 大蒜籽水浸液对钉螺的杀灭结果
时间 1d 1.5d 2d 2.5d 3d 3.5d
浓度（%） 杀灭率（%） 杀灭率（%） 杀灭率（%） 杀灭率（%） 杀灭率（%） 杀灭率（%）
100 100 100 100 100 100 100
50 85 100 100 100 100 100
25 70 100 100 100 100 100
12.5 65 100 100 100 100 100
6.23 45 80 100 100 100 100
3.13 30 75 100 100 100 100
1.57 30 68 90 100 100 100
0.79 28 58 80 100 100 100
对照组 0 0 0 3 12 20
3.3动物感染实验 每组感染小鼠分别涂抹浓度分别为100%、50.00%、25.00%、1 本文由wwW. dYLw.NeT提供，第一论文 网专业写作教育教学论文和毕业论文以及发表论文服务，欢迎光临dYlw.nET2.50%、6.23%、3.13%、1.57%、0.79%大蒜籽浸液，感染率均为0，对照组小鼠均检出血吸虫成虫，感染率为100%。见表二。
表二 不同浓度的山茶籽饼水浸液杀灭血
吸虫尾蚴感染小鼠的实验结果 第一次 第二次
浓度（%） 解剖小鼠数（只） 捡虫数（个） 无虫鼠数（只） 感染率（%） 浓度（%） 解剖小鼠数（只） 捡虫数（个） 无虫鼠数（只） 感染率（%）
100
50.00
25.00
12.50
6.23
3.13 5
5
5
5
5
5 0
0
0
0
0
0 5
5
5
5
5
5 0
0
0
0
0 100
50.00
25.00
12.50
6.23
3.13 5
5
5
5
5
5 0
0
0
0
0
0 5
5
5
5
5
5 0
0
0
0
0
0
0
1.57
0.79
对照组 5
5
5 0
0
123 5
5
0 0
0
100 1.57
0.79
对照组 5
5
5 0
0
164 5
5
0 0
0
100
4 讨论
日本血吸虫尾蚴是感染人体的阶段，主要通过皮肤感染人体。现阶段的日本血吸虫防御方法有物理、化学、生物等多方面的方法，主要通过杀灭其中间宿主来实现，其中以化学方法最为使用[7]。以吡喹酮、五氯酚钠、氯硝柳胺等物质为代表，然这些物质虽然能快速杀灭钉螺，但是或存在毒副作用，或存在环境污染，耗资大等问题。而植物灭螺药物存在天然无污染，资源丰富，毒性低，易降解等优点而备受关注。许多人开始研究植物灭螺药物，如刘建兵等（2000），张楚霜等（1995），边藏丽等（2007），黄琼瑶等（2003）。在我国已发现数十种植物对钉螺有强烈的毒杀作用，如山茶、大蒜、血水草、樟树叶等等，而大蒜籽灭螺主要是利用其有效成分大蒜辣素陈永军等，1999）。大蒜籽水浸液是纯天然物质，对环境没有任何污染，且对螺类有良好的毒杀效果。
本研究结果显示，大蒜籽水浸液有较好的杀灭日本血吸虫尾蚴和钉螺作用。大蒜籽水浸原液在2.32s内可迅速杀灭血吸虫尾蚴，浓度为0.79%大蒜籽水浸液杀灭日本血吸虫尾蚴的平均时间分别为294.02s，这表明，无论是高浓度还是低浓度的大蒜籽饼水浸液对日本血吸虫尾蚴的杀灭都较同类植物剂作用强。灭螺试验结果显示，100%浓度的大蒜籽水浸液在1d内可全部灭螺，而100%血水草生物碱在72h后才能全部灭螺[6]，低浓度的大蒜籽水浸液在2.5d内可全部灭螺，而对照组3.5d存活率仍为80%。这表明，无论是高浓度还是低浓度的大蒜籽浸液对钉螺的杀灭作用很强，能在较短时间内杀灭钉螺。同时，处理后的尾蚴感染小鼠实验结果显示小鼠的感染率均为零。对照组的小鼠感染率为100%，表明大蒜籽水浸液可以预防日本血吸虫尾蚴的感染，具有开发前景。本研究结果为进一步探讨天然无害性药物用于控制日本血吸虫中间宿主和预防日本血吸虫感染提供了科学依据。
参考文献：
[1]程周旺.“茶油”种种[N].黄山学院学报.2010，12（3）：68-70
[2]朱艳芳等.油茶籽饼水浸液对成鳝和仔鳝的短期毒性影响[J].中国水产.2007，377（4）
[3]王小艺，黄炳球，郑仲.茶皂素对7种植物病原菌的生物活性初测[J].植保技术与推广，1998，18（6）：34-35
[4]李金洪.茶皂素生物活性探索及其在饲料中的应用研究[D].浙江大学，2001.
[5]杨蓬，段红颜等.紫皮独蒜对日本血吸虫尾蚴和钉螺的杀灭效果[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2012，30（3）：245-246.
[6]彭飞，黄琼瑶等.血水草生物碱杀灭日本血吸虫尾蚴预防感染的实验研究[J].中国热带医学.2003，3（6）：734-735.
[7]张楚霜.灭螺药物研制情况之我见[J].中国血吸虫防治杂志.2003，15（6）：497
[8]张爱华，边藏丽等.大蒜籽浸液杀灭日本血吸虫尾蚴的实验研究[J].中国血吸虫防治杂 本文由wwW. dYLw.NeT提供，第一论文 网专业写作教育教学论文和毕业论文以及发表论文服务，欢迎光临dYlw.nET志.2007，19（3）：227-229.
作者简介：
田金升（1991-），男，长沙医学院12级本科临床在校生。
通讯作者：张琼 （1980-），女，硕士，讲师，主要在研究微生物学的进展与教学。
基金项目：长沙医学院2014年大学生研究性学习和创新性实验计划项目长医教〔2014〕10号-69
【关键词】大蒜籽水浸液；日本血吸虫；尾蚴
大蒜 Allium sativum L.（Garlic）又叫蒜头、大蒜头、胡蒜、葫、独蒜、独头蒜，是蒜类植物的统称。半年生草本植物，百合科葱属，以鳞茎入药。春、夏采收，扎把，悬挂通风处，阴干备用。6月叶枯时采挖，除去泥沙，通风晾干或烘烤至外皮干燥。含有硫胺素、核黄素、尼克酸、蒜素、柠檬醛以及硒和锗等微量元素。含挥发油约0.2%，油中主要成分为大蒜辣素，具有杀菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸受大蒜酶的作用水解产生。尚含多种烯丙基、丙基和甲基组成的硫醚化合物等。一般用来治疗细菌性痢疾和阿米巴痢疾。其提取物对多种细菌、霉菌、病毒等有杀灭或抑制作用，并对钉螺有杀灭作用。我们已报道大蒜籽浸液对日本血吸虫尾蚴有较好的杀灭效果。为了进一步了解大蒜籽浸液的有关作用，我们对大蒜籽浸液涂肤预防日本血吸虫尾蚴感染的效果进行了研究。研究不同浓度大蒜籽水浸液对日本血吸虫尾蚴的杀灭作用，来探寻一种既对环境无污染，又有高效的灭螺灭尾蚴作用的一类物质，来推进血吸虫防治的工作。
材料和方法
1 实验材料
1.1大蒜籽浸液制备 市场购大蒜籽250g，剥皮，脱氯清水洗净晾干，多功能食品粉碎机
捣碎压汁即成大蒜籽液（简称蒜液）。
1.2 尾蚴由湖南省血吸虫病防治研究所提供，实验当日释放尾蚴。
1.3 昆明小鼠，3月龄，重量20-25g，雌雄比例各半。
2 方法
2.1 杀灭尾蚴试验 实验当日逸放日本血吸虫尾蚴。分别吸取各浓度大蒜籽浸液100μl分别置于载玻片上，用接种环将尾蚴加入玻片上，每片加入活尾蚴100条左右（每浓度做5片），镜下观察记录杀灭尾蚴时间。以解剖针触及尾蚴，不活动者判为死亡[5]。至尾蚴全部死亡为杀灭尾蚴时间，设脱氯清水对照组。
2.2杀灭钉螺试验 取56个250ml矿泉水瓶，去除瓶口，洗净。每瓶加入大蒜籽浸液50ml，浓度分别为100%、50.00%、25.00%、12.50%、6.23%、3.13%、1.57%、0.79%，每个浓度6瓶。对照组加入脱氯水。每瓶随机加入10只钉螺，各组每天于相同时间随机取出一瓶，做存活检查，活动不明显者以压片鉴别死活[6]。
2.3动物感染试验 分别取100%、50.00%、25.00%、12.50%、6.23%、3.13%、1.57%、0.79%的大蒜籽浸液100μl于载玻片上，加入血吸虫尾蚴40条，放置30min后贴于已麻醉的小鼠腹部，感染20min。各浓度组感染5只，重复实验2次，40d后解剖，用灌注法加撕碎法收集虫体。首先经上腔静脉灌注冲洗，解剖镜下计数其肝、肠静脉丛内的虫体数，灌洗结束，取下肝、肠，用小镊子将肝与肠系膜拉碎，检查、计数未冲出的虫体，计算感染率。另设脱氯清水感染对照组。
3 结果
3.1 杀灭尾蚴作用 浓度分别为100%、50.00%、25.00%、12.50%、6.23%、3.13%、1.57%、0.79%杀灭日本血吸虫尾蚴的平均时间分别2.52s，9.38s，38.5s，64.64s，
103.28s，142.8s，194s，294.02s，对照组尾蚴直至载玻片上清水干燥为708.29s，仍有活跃尾蚴。
3.2杀灭钉螺作用 浓度分别为100%、50.00%、25.00%、12.50%、6.23%、3.13%、1.57%、0.79%大蒜籽浸液杀灭全部钉螺的时间为1、1.5、1.5、1.5、2、2、3、3d，对照组至3.5d后存活率仍有80%。见表一。
表一 大蒜籽水浸液对钉螺的杀灭结果
时间 1d 1.5d 2d 2.5d 3d 3.5d
浓度（%） 杀灭率（%） 杀灭率（%） 杀灭率（%） 杀灭率（%） 杀灭率（%） 杀灭率（%）
100 100 100 100 100 100 100
50 85 100 100 100 100 100
25 70 100 100 100 100 100
12.5 65 100 100 100 100 100
6.23 45 80 100 100 100 100
3.13 30 75 100 100 100 100
1.57 30 68 90 100 100 100
0.79 28 58 80 100 100 100
对照组 0 0 0 3 12 20
3.3动物感染实验 每组感染小鼠分别涂抹浓度分别为100%、50.00%、25.00%、1 本文由wwW. dYLw.NeT提供，第一论文 网专业写作教育教学论文和毕业论文以及发表论文服务，欢迎光临dYlw.nET2.50%、6.23%、3.13%、1.57%、0.79%大蒜籽浸液，感染率均为0，对照组小鼠均检出血吸虫成虫，感染率为100%。见表二。
表二 不同浓度的山茶籽饼水浸液杀灭血
吸虫尾蚴感染小鼠的实验结果 第一次 第二次
浓度（%） 解剖小鼠数（只） 捡虫数（个） 无虫鼠数（只） 感染率（%） 浓度（%） 解剖小鼠数（只） 捡虫数（个） 无虫鼠数（只） 感染率（%）
100
50.00
25.00
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0.79
对照组 5
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0.79
对照组 5
5
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4 讨论
日本血吸虫尾蚴是感染人体的阶段，主要通过皮肤感染人体。现阶段的日本血吸虫防御方法有物理、化学、生物等多方面的方法，主要通过杀灭其中间宿主来实现，其中以化学方法最为使用[7]。以吡喹酮、五氯酚钠、氯硝柳胺等物质为代表，然这些物质虽然能快速杀灭钉螺，但是或存在毒副作用，或存在环境污染，耗资大等问题。而植物灭螺药物存在天然无污染，资源丰富，毒性低，易降解等优点而备受关注。许多人开始研究植物灭螺药物，如刘建兵等（2000），张楚霜等（1995），边藏丽等（2007），黄琼瑶等（2003）。在我国已发现数十种植物对钉螺有强烈的毒杀作用，如山茶、大蒜、血水草、樟树叶等等，而大蒜籽灭螺主要是利用其有效成分大蒜辣素陈永军等，1999）。大蒜籽水浸液是纯天然物质，对环境没有任何污染，且对螺类有良好的毒杀效果。
本研究结果显示，大蒜籽水浸液有较好的杀灭日本血吸虫尾蚴和钉螺作用。大蒜籽水浸原液在2.32s内可迅速杀灭血吸虫尾蚴，浓度为0.79%大蒜籽水浸液杀灭日本血吸虫尾蚴的平均时间分别为294.02s，这表明，无论是高浓度还是低浓度的大蒜籽饼水浸液对日本血吸虫尾蚴的杀灭都较同类植物剂作用强。灭螺试验结果显示，100%浓度的大蒜籽水浸液在1d内可全部灭螺，而100%血水草生物碱在72h后才能全部灭螺[6]，低浓度的大蒜籽水浸液在2.5d内可全部灭螺，而对照组3.5d存活率仍为80%。这表明，无论是高浓度还是低浓度的大蒜籽浸液对钉螺的杀灭作用很强，能在较短时间内杀灭钉螺。同时，处理后的尾蚴感染小鼠实验结果显示小鼠的感染率均为零。对照组的小鼠感染率为100%，表明大蒜籽水浸液可以预防日本血吸虫尾蚴的感染，具有开发前景。本研究结果为进一步探讨天然无害性药物用于控制日本血吸虫中间宿主和预防日本血吸虫感染提供了科学依据。
参考文献：
[1]程周旺.“茶油”种种[N].黄山学院学报.2010，12（3）：68-70
[2]朱艳芳等.油茶籽饼水浸液对成鳝和仔鳝的短期毒性影响[J].中国水产.2007，377（4）
[3]王小艺，黄炳球，郑仲.茶皂素对7种植物病原菌的生物活性初测[J].植保技术与推广，1998，18（6）：34-35
[4]李金洪.茶皂素生物活性探索及其在饲料中的应用研究[D].浙江大学，2001.
[5]杨蓬，段红颜等.紫皮独蒜对日本血吸虫尾蚴和钉螺的杀灭效果[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2012，30（3）：245-246.
[6]彭飞，黄琼瑶等.血水草生物碱杀灭日本血吸虫尾蚴预防感染的实验研究[J].中国热带医学.2003，3（6）：734-735.
[7]张楚霜.灭螺药物研制情况之我见[J].中国血吸虫防治杂志.2003，15（6）：497
[8]张爱华，边藏丽等.大蒜籽浸液杀灭日本血吸虫尾蚴的实验研究[J].中国血吸虫防治杂 本文由wwW. dYLw.NeT提供，第一论文 网专业写作教育教学论文和毕业论文以及发表论文服务，欢迎光临dYlw.nET志.2007，19（3）：227-229.
作者简介：
田金升（1991-），男，长沙医学院12级本科临床在校生。
通讯作者：张琼 （1980-），女，硕士，讲师，主要在研究微生物学的进展与教学。
基金项目：长沙医学院2014年大学生研究性学习和创新性实验计划项目长医教〔2014〕10号-69
