分析羟色胺重摄取抑制剂对大鼠体内血清雌激素的影响

　　抑郁和认知障碍共同发生的现象或者说共病的发病率较高。Meta 分析显示老年抑郁、轻度认知障碍及老年痴呆可能是一个临床疾病的连续症状[1].目前，关于抑郁与认知障碍共病的具体分子机制尚不清楚，但不管是抑郁还是认知障碍，女性的发病率远远高于男性，所以雌激素作为区别于男女性别的重要激素而被关注。雌激素对情感和认知都有一定的影响，文献[2]报道雌激素水平的改变可以引起抑郁与认知障碍，雌激素也有治疗女性抑郁，改善女性认知障碍的作用。雌激素在大脑功能实现的信号通路主要是通过雌激素受体（ estrogen receptors,ERs）调节，经典的 ERs 包括 ERα 和 ERβ，而且大脑雌激素不仅来源于外周的雌二醇（ estradiol,E2） ,还可以自身合成[3].对于女性抑郁，因雌激素替代治疗存在的诸多弊端，非激素治疗越来越多的应用在绝经期症候群，特别是 5-羟色胺重摄取抑制剂（ selectiveserotonin reuptake inhibitor,SSRI） 对于改善绝经后抑郁有着明显的效果，而且 SSRI 联合雌激素使用时抗抑郁作用加强[4].另外一方面，SSRI 在抗抑郁治疗中，女性的效果明显好于男性，同时具有改善认知功能和重塑神经细胞的作用[5].SSRI 类药物有性别的差异和对认知功能改善的效果，其原因文献[6]报道是雌激素对五羟色胺（ 5-hydroxytryptamine,5-HT）系统有影响，但 SSRI 对雌激素系统的作用，除了对水生动物的少量研究外，在大鼠中的研究鲜有报道，所以该研究采用双侧卵巢切除 （ ovariectomized,OVX） SD 大鼠，初步探讨 SSRI 抗抑郁剂是否影响大鼠体内血清雌激素水平及其受体在海马的表达，来间接反映大脑中的雌激素水平。

　　1 材料与方法

　　1. 1 实验方案 应用 SD 雌性大鼠双侧 OVX 模型作为低雌激素的女性抑郁[7]和认知障碍模型[8],按是否应用 SSRI 类药物（ 盐酸帕罗西汀） 干预进行亚组分组，另设立成年健康假手术组作为空白对照。治疗前后进行 Morris 水迷宫实验来验证帕罗西汀对大鼠学习记忆能力的影响； ELISA 方法测量大鼠血清黄体生成素（ luteinizing hormone,LH） 、卵泡刺激素（ follicle stimulating hormone,FSH） 、雌激素； 免疫组化法观察大鼠海马 ERα 和 ERβ 的阳性细胞表达数。

　　1. 2 实验动物模型制作和分组 约 3 月龄成年健康 SD 大鼠，250 ~300 g,购自广东省实验动物中心，于广州医学院动物中心饲养。成年大鼠随机分为双侧卵巢切除大鼠空白对照组（ OVX 对照组） 、双侧卵巢切除大鼠帕罗西汀干预组（ OVX 药物组） 、正常大鼠空白对照组（ 正常对照组） ,每组 8 只。双侧卵巢切除术： 大鼠检疫 1 周通过后进行双侧卵巢切除术，在动物实验室进行。对于正常对照组大鼠，除了未切除大鼠双侧卵巢，其他操作同前。所有大鼠搬回另一动物室，喂养充足的水和饲料，1 周后大鼠基本恢复。药物干预： 帕罗西汀的用药剂量是 10 mg/kg,实验组每只大鼠药物干预前称重，每 10 mg 帕罗西汀用 5 ml 生理盐水稀释，蒸馏水的灌胃容积 5ml /kg,灌胃 4 周； 正常对照组和 OVA 对照组用等量的生理盐水灌胃 4 周，每天上午 9: 00 ~10: 00 灌胃。Morris 水迷宫实验： 于治疗前和治疗结束后的第 1天行学习记忆能力测定。采用 Morris 水迷宫（ 定位航行实验和空间探索实验） 检测大鼠空间学习记忆功能。

　　1. 3 ELISA 法检测雌激素、LH、FSH 水平 ELISA试剂盒购自北京绿源博德生物科技有限公司，空白孔加标准品稀释液或标本，其余相应孔中加测试标本，所有标本集中检测。

　　1. 4 免疫组化法检测大鼠海马 ERα 和 ERβ 的表达 免疫组化 S-P 超敏试剂盒、DAB 显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司； ERα 抗体（ sc-542） 、ERβ 抗体（ sc-6821） 购自美国 Santa Cruz Bio-technology 公司） .通过取材固定和冰冻切片，生物素标记 DAB 显色等； 空白对照实验，用 PBS 代替一抗，其余步骤不变。最后在放大 200 倍照片上用 I-magine J 软件采用人工计数的方法来计算 ERα 和ERβ 的表达的细胞数。

　　1. 5 统计学处理 使用 SPSS 13. 0 统计软件分析，数据均以珋x ± s 表示，采用方差分析（ ANOVA） .不符合方差齐性或非正态分布数据采用对数转换，使其符合正态分布。